جداسازی و شناسایی اکتینومیست‌های تولید کننده‌ ترکیبات ضدمیکروبی از رسوبات بستر دریای مازندران

۱-۱- تاریخچه آنتی بیوتیک

۱-۱-۱- مکانیسم عمل آنتی بیوتیک‌ها

۱-۱-۲- ژنتیک تولید آنتی بیوتیک

۱-۱-۳- عوامل موثر بر تولید آنتی بیوتیک

۱-۱-۴- ویژگی‌های یک آنتی‌بیوتیک

۱-۲-نیاز به کشف ترکیبات فعال زیستی

۱-۲-۱- کشف ترکیبات فعال زیستی

۱-۲-۲- محدودیت های کشف ترکیبات فعال از طبیعت

۱-۳- روش‌های نوین کشف دارو

۱-۳-۱- منابع برای داروهای جدید

۱-۳-۲-  روند کنونی کشف دارو

۱-۳-۳- مقاومت به آنتی‌بیوتیک‌ها و نیاز به داروهای جدید

۱-۳-۴-  استفاده توام از آنتی‌بیوتیک‌ها

۱-۴-  علت انتخاب میکروارگانیسم‌ها برای کشف ترکیبات فعال زیستی

۱-۵- اکتینومیست‌ها

۱-۵-۱-  ویژگی‌ اکتینومیست‌ها

۱-۵-۲-  مورفولوژی اکتینومیست‌ها

۱-۵-۳-  فیزیولوژی اکتینومیست‌ها

۱-۵-۴- اکولوژی اکتینومیست‌ها

۱-۵- ۵- طبقه بندی اکتینومیست‌ها

۱-۵-۶- متابولیت‌های ثانویه

۱-۵- ۷- اکتینومیست‌های تولید کننده ترکیبات فعال

۱-۵-۸- تنوع شیمیایی ترکیبات تولید شده توسط اکتینومیست

۱-۵-۸-  اهمیت استرپتومیسس‌ها

۱-۵-۹-  اکتینومیست‌های دریایی

۱-۵-۱۰-متابولیت‌های ضد قارچی و اهمیت اکتینومیست‌های دریایی

۱-۵- ۱۱- اکتینومیست‌های دریایی، منبعی برای کشف داروی جدید

۱-۶- اهداف پژوهش

۲- مواد و روش‌ها:

۲-۱- دستگاه‌ها و تجهیزات

۲-۲- محلول‎ها و مواد مورد نیاز

۲-۳- جمع‌آوری نمونه

۲-۴- غنی‌سازی و کشت اکتینومیست‌ها

۲-۵- جداسازی و تهیه کشت خالص اکتینومیست‌ها

۲-۶- حفظ و نگهداری ذخایر کشت باکتریایی

۲-۶-۱- نگهداری کوتاه‌مدت

۲-۶-۲- روش نگهداری بلند مدت

۲-۷- شناسایی باکتری‌ها

۲-۷-۱- بررسی مورفولوژی

۲-۷-۲- بررسی مورفولوژی باکتریایی و رنگ‌آمیزی گرم

۲-۷-۳-تولید پیگمان محلول

۲-۸-غربالگری اولیه اکتینومیست های دارای فعالیت ضد باکتریایی

۲-۹- استخراج عصاره خام جدایه‌های فعال اکتینومیست

۲-۱۰-غربالگری ثانویه برای یافتن متابولیت‌های ضد میکروبی

۲-۱۰-۱-بررسی فعالیت ضد باکتریایی سویه‌های فعال

۲-۱۰-۲-بررسی فعالیت ضد قارچی سویه‌های فعال

۲-۱۰-۳-فعالیت سینرژیسمی عصاره خام اکتینومیست‌ها با آنتی بیوتیک

۲-۱۰-۴- فعالیت عصاره خام اکتینومیست‌ها علیه استافیلوکوکوس‌ اورئوس مقاوم به متی‌سیلین

۲-۱۲-بررسی فعالیت اگزوآنزیمی سویه‌های فعال

۲-۱۳- استخراج  نوکلئیک اسید به روش بیدبیتر

۲-۱۴- الکتروفورز با ژل آگارز ۸/۰ درصد

۲-۱۵- تکثیر ژن rDNA 16S

۲-۱۵-۱- برنامه PCR برای ژن‌های ۱۶S rDNA:

۲-۱۶- تخلیص محصول PCR

۲-۱۷- بررسی مولکولی ژن ۱۶S rDNA

۲-۱۷-۱- تعیین توالی ژن ۱۶S rDNA:

۲-۱۷-۲- انجام BLAST

۲-۱۷-۳- رسم درخت فیلوژنی ژن ۱۶S rDNA

۳- نتایج

۳-۱- جداسازی اکتینومیست‌ها

۳-۲- غربالگری اولیه جهت شناخت جدایه‌های فعال

۳-۳- غربالگری ثانویه جدایه‌های فعال علیه باکتری‌های بیماریزا

۳-۴- بررسی فعالیت ضد قارچی جدایه‌های فعال

۳-۵- فعالیت سینرژیسمی عصاره خام اکتینومیست‌ها با آنتی بیوتیک

۳-۶- فعالیت عصاره خام اکتینومیست‌ها علیه استافیلوکوکوس‌ اورئوس مقاوم به متی‌سیلین (MRSA)

۳-۷- فعالیت آنزیمی جدایه‌ها

۳-۸- مورفولوژی اسپور کلنی و رنگ آمیزی جدایه‌ها

۳-۹-تولید پیگمان محلول

۳-۱۰- استخراج نوکلئیک اسید و آنالیز آن با الکتروفورز

۳-۱۱- تکثیر ژن ۱۶s rDNA جدایه‌های فعال

۳-۱۱-۱- شناسایی مولکولی جدایه‌ها و رسم درخت فیلوژنی ژن ۱۶S rDNA

۴- بحث و پیشنهادات

۴-۱- جداسازی اکتینومیست‌های دریایی

۴-۲- غربالگری سویه‌های اکتینومیست فعال

۴-۳- استخراج متابولیت‌ها

۴-۴-غربالگری ثانویه عصاره خام جدایه‌های فعال

۴-۵- فعالیت عصاره خام اکتینومیست‌ها علیه استافیلوکوکوس‌ اورئوس مقاوم به متی‌سیلین

۴-۶- مورفولوژی کلنی‌ها

۴-۷- بررسی توالی‌ ۱۶S rDNA

۴-۸- جمع بندی

۴-۹-پیشنهادات