استفاده ازماده ترت بوتیل هیدروپراکساید t-BHPیک مدل حیوانی از استرس اکسیداتیو به منظور مطالعه اثر آن در چگونگی بیان ژن

۱- ناباروری

۱-۱- علل ناباروری در مردان

۱-۲- رادیکال‌های آزاد

۱-۲-۱- تعریف و نحوه تشکیل رادیکال‌‌های آزاد

۱-۲-۲- نحوه عملکرد رادیکال‌های آزاد

۱-۲-۳- گونه­های فعال اکسیژن و نیتروژن

۱-۲-۳-۱- نقش­های بیولوژیک ROS

۱-۲-۴- تولید و منبع رادیکال­های آزاد

۱-۲-۴-۱- تولید ROS توسط اسپرماتوزوآی غیر طبیعی

۱-۲-۴-۲- تولید ROS توسط لکوسیت­ها

۱-۲-۵- استرس اکسیداتیو

۱-۲-۵-۱- مکانیسم عملکرد استرس اکسیداتیو

۱-۲-۵- اثرات استرس اکسیداتیو

۱-۲-۵-۱- استرس اکسیداتیو و آسیب به DNA

۱-۲-۶-۱-۲- اهمیت سلامت DNA اسپرم

۱-۲-۶-۲-استرس اکسیداتیو در اسپرم

۱-۲-۶-۳- استرس اکسیداتیو و بیماری­های دیگر

۱-۲-۷- اثراتROS

۱-۲-۷-۱- پراکسیداسیون لیپیدی غشای پلاسمایی اسپرم

۱-۲-۷-۲- اثر روی تحرک اسپرم

۱-۲-۸-  ROS و استرس اکسیداتیو مایع منی

۱-۲-۹-  ROS و ناباروری

۱-۲-۱۰- آنتی اکسیدان­ها

۱-۲-۱۰-۱- نحوه عملکرد آنتی­اکسیدان­ها به دو روش طبقه بندی میشود:

۱-۲-۱۱- اثرات آنتی­اکسیدان­ها

۱-۲-۱۱-۱- تاثیر بر تحرک اسپرم

۱-۲-۱۱-۲- تاثیر بر روی کاهش آسیب­های بعد از انجماد اسپرم

۱-۲-۱۱-۳- تاثیر آنتی­اکسیدان­ها در جلوگیری از آسیب بهDNA

۱-۲-۱۲- نقش آنتی­اکسیدان­ها (رباینده­های­بالقوهROS) دراسپرم

۳-۱- ژنتیک و ناباروری مردان

۱-۳-۱- ژن انتخابی مورد مطالعه

۱-۴- اهداف:

۱-۵-فرضیات:

فصل دوم مروری بر مطالعات گذشته

۲-۱-  مروری بر مطالعات علمی گذشته

فصل سوم مواد و روش­ها

۳-۱- تعیین گروه­های آزمایشی

۳-۲- جمع آوری نمونه­ها و محل انجام آزمایش

۳-۳- القاء استرس اکسیداتیو با تزریق t-BHP

۳-۴-  تک سلول کردن بافت بیضه

۳-۵- شمارش تعداد سلول­های زنده در بافت بیضه

۳-۶-۱- روش فلوسایتومتری

۳-۶-۲-  سنجش ROS در بیضه بوسیله فلوسایتومتری

۳-۷- روشهای تعیین آسیب DNA اسپرم

۳-۷-۱- تست TUNEL جهت ارزیابی شکست  DNAاسپرم

۳-۷-۲- جمع‌آوری سلول‌های اسپرمی جهت آنالیز شکستهای DNA اسپرم

۳-۷-۳-  محلولها و بافرهای مورد نیاز جهت روش TUNEL، به منظور ارزیابی شکست DNA اسپرم

۳-۷-۴- مراحل انجام آزمایش TUNEL

۳-۷-۵- نحوه استفاده از کیت TUNEL

۳-۸-  بررسی بیان ژن Kdm5d یا Smcy

۳-۸-۱- استخراج RNA به روش ترایزول

۳-۸-۲- بررسی کیفی RNAهای استخراج شده به وسیله الکتروفورز روی ژل آگارز

۳-۸-۳- تیمار کردن نمونه­های RNAی استخراج شده

۳-۸-۴-  سنتزDNA  مکمل (cDNA) از روی الگوی RNA

۳-۸-۵- روش انجام واکنش زنجیرهای پلی مراز (PCR) جهت اطمینان از سنتز cDNA

۳-۸-۶-روش تهیه­ی ژل آگارز و انجام الکتروفورز

۳-۸-۷- طرز تهیه­ی محلول­ها

۱- بافر۵۰x TAE

۲- محلول رنگ آمیزی اتیدیوم برماید (۱۰mg/ml)

۳-۸-۸- بررسی کمی بیان ژن با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمرازپیوسته

۳-۸-۸-۱-روش Ct مقایس­های برای کمی سازی نسبی

۳-۸-۶- آنالیز آماری

فصل چهارم نتایج

۴-۱-  بررسی وزن بدن و بافت بیضه پس از ۱۴ روز تزریق

۴-۲- بررسی ماکروسکوپی بافت بیضه

۴-۳- بررسی میزان ROS در بیضه­ی گروه کنترل و آزمون

۴-۳-۱- اندازه گیری میزان O2 و H2O2

۴-۴-  نتایج ارزیابی شکست DNA اسپرم با تست TUNEL

۴-۵- بررسی وضعیت بیانی ژن Kdm5d در بافت بیضه

۴-۵-۱- استخراج RNA کل از بافت بیضه

۴-۵-۲- بررسی صحت سنتز cDNA

۴-۵-۳- بررسی بیان کمی ژن Kdm5d در بافت بیضه

فصل پنجم بحث و نتیجه­ گیری

۵-۱- بحث و نتیجه گیری کلی

۵-۲- پیشنهادات:

منابع

خلاصه انگلیسی