غربالگری اکتینومایست‌های نگهداری شده در کلکسیون میکروارگانیسم‌های دانشگاه تهران برای تولید ترکیبات ضد سرطان ریه

فصل اول: کلیات

سرطان

علل سرطان

خصوصیات سلول توموری

روش ‌های درمان سرطان

تاریخچه ی شیمی درمانی

مقاومت دارویی

فارماکولوژی پایه داروهای شیمی درمانی سرطان

داروهای آلکیله کننده

آنتی متابولیت‌ها

هورمون‌ها

فراورده‌‌های گیاهی

آنتی بیوتیک‌های ضدسرطان

اکتینومایسین

داکتینومایسین

آنتراسیکلین

دانوروبیسین

دوکسوروبیسین هیدروکلراید

میترامایسین

بلئومایسین سولفات

میتومایسین‌ها

میترامایسین C

استرپتوزوستین

سرطان ریه

علائم سرطان ریه

سرطان در ایران

اکتینومیست‌ها

متابولیت‌های ثانویه‌ی اکتینومیست‌ها

هدف از پژوهش

فصل دوم: پیشنه‌ی تحقیق

فصل سوم: مواد و روشها

ترکیبات استفاده شده

دستگاه های استفاده شده

سویه‌های اکتینومیست

آماده‌سازی محیط کشت تولید اسپور باکتری

آماده‌سازی محیط پیش کشت

آماده‌سازی محیط کشت تخمیر

احیا و کشت سویه

تهیه پیش کشت

تولید متابولیت‌ها

استخراج متابولیت‌ها

نگهداری عصاره‌ها

غربالگری اولیه، ارزیابی فعالیت سمیت

کشت آرتمیا

آزمون ارزیابی سمیت در آرتمیا

غربالگری ثانویه، ارزیابی سمیت در کشت سلولی

انتخاب دودمان سلولی

محیط کشت

مراحل تهیه محیط کشت دودمان سلولی A

تجدیدکشت دودمان سلولی A

شمارش سلول‌ها و بررسی میزان فعالیت سلول

تهیه محلول تریپسین

آزمون MTT

شمارش سلول برای انجام آزمونMTT

روش انجام آزمون MTT دراین پژوهش

بررسی ریخت‌شناسی سلول‌ها تیمار شده با عصاره اکتینومیست‌ها

شناسایی سویه‌های منتخب اکتینومیست

بررسی مورفولوژی میکروسکوپی

بررسی میسلیوم‌های هوایی و آرایش زنجیره اسپوری

بررسی رشد میسلیومی در محیطISP broth

مطالعه شیمیوتاکسونومی

تهیه بیومس برای تعیین ایزومر دی آمینوپامیلیک اسید(DAP)

تعیین ایزومر DAPموجود در دیواره سلولی

شناسایی توالی نوکلئوتیدی ژن S rRNA سویه‌های منتخب

تهیه محیط کشت Luria Broth(LB)

تهیه زیست توده برای مطالعات فیلوژنتیک

استخراج DNA

تائید بررسی کیفیت استخراج DNA

تهیه ژل آگاروز

تهیه بافر(TAE)TrisAcetateEDTA

انجام فرایند واکنش زنجیره پلیمراز(PCR)

شرایط واکنش PCR

بررسی محصولات PCR

خالص سازی محصولات PCR

تعیین توالی نوکلئوتیدی قطعات تکثیر شده از ژن S rRNA

مقایسه توالی نوکلئوتید ژن S rRNA سویه‌های اکتینومایست منتخب

فصل چهارم: نتایج

شرایط پیش تخمیر و تخمیر و میزان متابولیت تولید شده توسط سویه  اکتینومیست‌ بررسی شده در این پژوهش

نتایج حاصل از تست ارزیابی سمیت متابولیت‌های ثانویه

نتایج مربوط به بررسی ریخت شناسی سلول‌ها در تست سمیت سلولی

نتایج مربوط به تست سمیت سلولی با روش MTT

بررسی ریخت‌شناسی سلول‌ها پس از تیمار با عصاره سویه‌ی اکتینومیست‌های منتخب

شناسایی اکتینومیست‌های منتخب

بررسی ریخت شناسی اکتینومیست‌های منتخب

تعیین ایزومر DAP موجود در دیواره سلولی

بررسی فیلوژنتیکی اکتینومیست‌های منتخب

تائید استخراجDNA اکتینومیست‌های منتخب

تائید استخراج ژنS rRNA از ژل آگاروز

نتایج مربوط به توالی خوانی ژن S rRNA

 فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری