بررسی نسبت جمعیتی اسپرم‌های واجد کروموزم X‌و Y تحت تأثیر برخی عوامل محیطی در گونه گاو با استفاده از تکنیک Real-Time PCR

جنسیت موالید در صنعت دامپروری و از نظر اقتصادی بسیار حائز اهمیت است.افزایش بهره ­وری اقتصادی و نیز کنترل بیماری­های ژنتیکی وابسته به جنس ارتباط مستقیمی با جنسیت موالید دارد.نسبت جنسی موالید اتفاقی نبوده و عوامل مختلفی در تعیین جنسیت موالید نقش دارد.یکی از این عوامل،نسبت جنسیتی اسپرم­های واجد کروموزوم X و Y در انزالِ طبیعی است. مهم‌ترین عوامل محیطی که احتمال می‌رود روی این نسبت تاثیر داشته باشد،استرس گرماییو تفاوت‌های فردی می‌باشد. در مطالعه حاضر به بررسی تغییر نسبت جمعیتی اسپرم‌های واجد کروموزوم Y به اسپرم‌های واجد کروموزومX در انزال گاو نر تحت تاثیر تنش گرمایی و بررسی تفاوت‌های فردی با استفاده از تکنیک Real-Time PCR پرداخته شد. به این منظور از ۷ رأس گاو نر بالغ در دو فصل گرم (تحت تأثیر استرس گرمایی) و سرد نمونه­گیری به عمل آمد و پس از استخراج محتوی ژنتیکی، با استفاده از سه جفت آغازگر ژن­های SRY (شاخص کروموزوم Y)،PLP (شاخص کروموزوم X ) و PAR (ژن خانه­دار)و با استفاده از روش Q-PCR مورد ارزیابی کمی قرار گرفتند.نتایج این تحقیق نشان داد که نسبت جمعیتی کروموزوم­های واجد X و Y در انزال طبیعی در میان دام­ها یکسان نیست.

نوع فایل :word

تعداد صفحات :۱۴۱

*———————————–*

فصل اول: کلیات

پیشگفتار

۱-۱-آناتومی دستگاه تناسلی دام نر

۱-۱-۱-     اسپرماتیک کورد (بند بیضه)

۱-۱-۲-  اسکروتوم(کیسه بیضه)

۱-۱-۲-۱-     ماهیچه دارتوس

۱-۱-۲-۲-  تونیکا واژنیالیس

۱-۱-۳-    بیضه‌ها

۱-۱-۴-        اپیدیدیم

۱-۱-۵-     غدد ضمیمه تناسلی

۱-۱-۵-۱   آمپولا

۱-۱-۵-۲-  وزیکول سمینال

۱-۱-۵-۳-  پروستات

۱-۱-۵-۴-  غدد کوپر

۱-۱-۶-   آلت تناسلی نر

۱-۲-         فیزیولوژی دستگاه تناسلی دام نر

۱-۲-۱-  اسپرماتوژنز

۱-۲-۱-۱- اسپرماتوسیتوژنز

۱-۲-۱-۲- اسپرمیوژنز

۱-۲-۱-۳- روند کلی اسپرماتوژنز

۱-۲-۲-  اسپرم

۱-۲-۳- مایع منی

۱-۳-۳-   تفاوت اسپرم‌های واجد کروموزوم X و Y

۱-۳-۴-         تعریف نسبت جنسی

۱-۳-۵-      اهمیت کنترل نسبت جنسی

۱-۳-۶-    عوامل موثر بر انحراف نسبت جنسی

۱-۳-۶-۱-  عوامل ژنتیکی و فیزیولوژیکی

۱-۳-۶-۲- عوامل محیطی

۱-۳-۷-     روش‌های تعیین نسبت جنسی اسپرم

۱-۴-        واکنش زنجیره­ای پلیمراز کیفی(  PCR)

۱-۵-        واکنش زنجیره­ای پلیمرازکمّی((Real-Time PCR

۱-۵-۱-  تعریف واکنش (Real-Time PCR)

۱-۵-۲- مزایای واکنش Real-Time PCR

۱-۵-۳-مراحل اصلی واکنش Real-Time PCR

۱-۵-۴- روش­های انجام واکنش Real-Time PCR

۱-۵-۴-۱- قالب غیر اختصاصی Nonspecific Format

۱-۵-۴-۲- قالب اختصاصی Specific Format

۱-۵-۴-۲-۱- شناساگرهای دوسویه نشاندار یا شناساگرهای TaqMan

۱-۵-۴-۲-۲- شناساگرهای بیکون مولکولی

۱-۵-۴-۲-۳- سیستم شناساگر FRET

۱-۵-۴-۲-۴- شناساگرهای عقربی

۱-۵-۴-۲-۵- سایر سیستم­ها

۱-۵-۵- برخی مفاهیم و اصطلاحات در تکنیک Real-Time PCR

۱-۵-۵-۱- منحنی تکثیر

۱-۵-۵-۲- گزارشگر نرمال­شده((Rn

۱-۵-۵-۳- چرخه آستانه( (CT

۱-۵-۵-۴- منحنی ذوب

۱-۵-۵-۵- منحنی استاندارد

۱-۵-۶- آنالیز داده‌های کمی

فصل دوم: مروری بر متون گذشته

۲-۱-  مطالعات پیرامون نسبت جنسی

۲-۲-  مطالعات روی روش­های تعیین نسبت جنسی

فصل سوم: مواد و روش­ها

۳-۱-زمان و محل انجام تحقیق

۳-۲-مراحل انجام کار

۳-۲-۱- تهیه اسپرم

۳-۲-۲- استخراج DNA از سلول­های اسپرم

۳-۲-۲-۱- مواد و لوازم استخراج DNA

۳-۲-۲-۲- روش کار برای استخراج DNA

۳-۲-۲-۲-۱- شستشوی اسپرم

۳-۲-۲-۲-۱-۱- ساخت محلول PBS

۳-۲-۲-۲-۱-۲- شستشو

۳-۲-۲-۲-۲- پروتئین­زدایی

۳-۲-۲-۲-۲-۱- ساخت محلول Lysis Buffer

۳-۲-۲-۲-۲-۲- رسوب پروتئین­ها

۳-۲-۲-۲-۳- جداسازی DNA

۳-۲-۲-۲-۴- تعیین غلظت DNA

۳-۲-۲-۲-۴-۱- استفاده از ژل آگارز

۳-۲-۲-۲-۴-۱-۱- مواد و لوازم ساخت ژل آگارز

۳-۲-۲-۲-۴-۱-۲- روش کار با ژل آگارز

۳-۲-۲-۲-۴-۲– استفاده از دستگاه اسپکتروفوتومترِ نانودراپ

۳-۲-۳- واکنش PCR کیفی

۳-۲-۳-۱- هدف از واکنش PCR کیفی

۳-۲-۳-۲- مواد و لوازم برای واکنش PCR کیفی

۳-۲-۳-۳- روش انجام واکنش PCR کیفی

۳-۲-۳-۳-۱-  طراحی آغازگر

۳-۲-۳-۳-۲- رقیق­سازی آغازگرها

۳-۲-۳-۳-۳- محاسبه مقادیر واکنشPCR کیفی

۳-۲-۳-۳-۴- تعیین شرایط واکنشPCR کیفی

۳-۲-۳-۳-۵- آماده­سازی مخلوط واکنشPCR کیفی

۳-۲-۳-۳-۶- الکتروفورز محصولات PCR کیفی

۳-۲-۴- واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۱- – هدف از انجام واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۲- مواد و لوازم برای واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۳- روش انجام واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۳-۱- رقیق­سازی آغازگرها

۳-۲-۴-۳-۲- محاسبه مقادیر در واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۳-۳- تعیین شرایط دمایی و زمانی واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۳-۴- رسم منحنی استاندارد از طریق واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۳-۵- بررسی CT و TM از طریق واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۳-۶- آماده ­سازی مخلوط واکنش Real-Time PCR

۳-۲-۴-۳-۷- آنالیز داده­های واکنش Real-Time PCR

فصل چهارم : نتایج

۴-۱- نتایج استخراج DNA

۴-۱-۱-   نتیجه الکتروفورز محصولات استخراجDNA

۴-۱-۲- نتیجه غلظت­خوانی با دستگاه نانودراپ

۴-۲- نتیجه الکتروفورز محصولات PCR

۴-۳- نتایج حاصل از Real-Time PCR

۴-۳-۱- منحنی استاندارد

۴-۳-۲- منحنی ذوب و محاسبه TM

۴-۳-۳- منحنی تکثیر و محاسبه CT

۴-۳-۴- نتیجه الکتروفورز محصولات Real-Time PCR

۴-۳-۵- آنالیز کمّی داده ­ها

فصل پنجم : بحث وپیشنهادات

۵-۱- بحث       ۹۹

۵-۲- پیشنهادات