جداسازی و شناسایی مولکولی باکتری‌های خاک‌زی مولد آنزیم ال-آسپارژیناز

فصل اول: کلیات

چکیده فارسی

مقدمه

۱-۱ آنزیم ال-آسپاراژیناز

۱-۲   میکرو ارگانیسم‌های تولید کننده‌

۱-۳   مکانیسم تنظیم‌کننده ترشح آنزیم آسپاراژیناز

۱-۴  کلاس‌های عمومی از ال-آسپاراژیناز

۱-۵  روش تعیین سختی و ساختار ال-آسپاراژیناز

۱-۶ ویژگی‌های ساختاری ال-آسپاراژیناز

۱-۶-۱ساختار مونومری آنزیم ال-آسپاراژیناز

۱-۶-۱-۱ شرح جایگاه فعال ال-آسپاراژیناز

۱-۶-۲ ساختار تترامر آنزیم ال-آسپاراژیناز

۱-۶-۳ ساختار اُکتامر آنزیم ال-آسپاراژیناز

۱-۷ انواع آنزیم ال-آسپاراژیناز برحسب منشأ جداسازی

۱-۷-۱-آنزیم‌های بومی

۱-۷-۱-۱  ال-آسپاراژینازی از اشرشیا کلی

۱-۷-۱-۲ ال-آسپاراژینازی از اروینیا

۱-۷-۲ آنزیم اصلاح‌شدهPEG)  -آسپاراژیناز)

۱-۸  کاربرد ال – آسپاراژینازها

۱-۸- ۱  مکانیسم عمل به‌عنوان یک کمک‌کننده به فرآوری مواد غذایی

۱-۸-۲  مکانیسم عمل به‌عنوان یک دارو

۱-۹ علم شیمی و فارماکولوژی برای دارو

۱-۱۰ نیمه‌عمر دارو

۱-۱۱ مسائل و رویکردهای مرتبط با استفاده درمانی از ال-آسپاراژیناز

۱-۱۱-۱ عوارض ایمونولوژیک

۱-۱۱-۲ مقاومت در برابر آسپاراژیناز

۱-۱۱-۳ سمیت دارو

۱-۱۲ فارموکینیتیک

فصل دوم : مروری بر تحقیقات انجام‌شده

۲_۱ تحقیقات انجام‌شده در ایران و خارج از ایران

۲-۱-۱ تحقیقات انجام شده بر روی باکتری های خاکزی مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز

۲-۱-۲ تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز به منظور بهینه سازی

۲-۱-۳ تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز با استفاده از محیط کشت اختصاصی M9

۲-۱-۴ تحقیقات انجام شد بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز با استفاده از روش نسلریزاسیون

۲-۱-۵ تحقیقات انجام شده بر روی باکتری های مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز جدا شده ار آب و رسوبات

۲-۱-۶ تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز بر اساس روش  SDS-PAGE

فصل سوم: مواد و روش‌ها

۳-۱ غربالگری سویه‌های مولد آنزیم از خاک

۳-۲   جداسازی و کشت باکتری

۳-۲-۱   مواد و وسایل لازم جهت جداسازی و کشت باکتری از خاک

۳-۲-۲   کشت

۳-۳   فعالیت آنزیم

۳-۴ روش‌های اندازه‌گیری آمونیاک

۳-۵    مواد و وسایل لازم بررسی فعالیت آنزیم

۳-۶    معرف آزمایش

۳-۷ خواندن جذب لوله‌های Test و Blank

۳-۸ مراحل کلونینگ

۳-۹  شرح مراحل کلونینگ

فصل چهارم: نتایج

۴-۱   نتایج مربوط به جداسازی

۴-۱-۱   نتایج کشت

۴-۱-۲   نتایج رنگ‌آمیزی گرم و تست‌های بیوشیمیایی

۴-۱-۳   نتایج بررسی فعالیت آنزیمی

۴-۱-۴ نتیجه آنالیز کیفی قطعه تکثیر یافته

۴-۱-۵  نتایج مربوط به مستعد سازی

۴-۱-۶ نتایج مربوط به کشت ماتریکس

۴-۱-۷ نتایج تست Quick- check

۴-۱-۸ نتایج استخراج پلازمید

۴-۱-۹ نتایج PCR تاییدی

۴-۱-۱۰  نتایج تعیین توالی نمونه

: Bacillus cereus strain

۴-۱-۱۱  نتایج تعیین توالی نمونه

: Bacillus thuringiensis strain

۴-۱-۱۲  نتایج تعیین توالی نمونه

: Oerskovia turbata

فصل ۵  نتایج

۵-۱ نتیجه

۵-۲ جمع بندی

۵-۳ محدودیت ها

۵-۴ پیشنهادها