تاثیر کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشه ای بر بیان ژنهای اختصاصی اندودرم اولیه رویان موش

مطالعات انجام شده در سال­های اخیر نشان می­دهند که سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست قبل از انجماد شیشه ­ای، در بهبود کیفیت رویان­های ذوب شده موثر است. اما در این مطالعات، به نقش آب درون حفره و تاثیر آن بر روی تشکیل رده­های سلولی بلاستوسیست، توجه نشده است. بنابراین در تحقیق حاضر، علاوه بر ارزیابی نرخ زنده­مانی و خروج از زونا، اثر کاهش مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشه ­ای، بر روی میزان بیان ژن­های Gata6 و Grb2 در بلاستوسیست درون­تنی و برون­تنی منجمد-ذوب شده و سوراخ شده قبل از انجماد بررسی شد و با گروه کنترل مقایسه گردید. در این مطالعه، میزان خروج از زونا با سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست قبل از انجماد، به­صورت     معنی­داری افزایش یافت. این در حالی است که میزان زنده­مانی در گروه ­های تحت تیمار، مشابه با گروه کنترل، بالا بود. انجماد شیشه ­ای موجب افزایش در میزان بیان ژن­های Gata6 و Grb2 شد (p<0.05). اما با کاهش مایع بلاستوسل قبل از انجماد، در بلاستوسیست­های درون­تنی، میزان بیان این ژن­ها نسبت به گروه انجماد شیشه­ای به صورت معنی­داری کاهش پیدا کرد و به گروه کنترل نزدیک شد (p<0.05). در حالی که در مورد بلاستوسیست­های برون­تنی، با استفاده از این تکنیک، بیان ژن Grb2 افزایش پیدا کرد ولی تفاوت معنی­داری در میزان بیان ژن Gata6 نسبت به گروه انجماد شیشه­ای ایجاد نشد. از   آن­جایی که هیچ نتیجه ای مبنی بر تاثیر منفی استفاده از این تکنیک مشاهده نگردید و با توجه به افزایش میزان خروج از زونا، کاهش حجم مایع بلاستوسل قبل از انجماد شیشه­ای می­تواند مفید واقع شود.

نوع فایل :word

تعداد صفحات :۱۰۱

*———————————–*

۱-۱     تکوین پیش از لانه ­گزینی در موش

۱-۱-۲     تکوین اولیه

۱-۱-۳     مکانیسم­های مولکولی دخیل در لایه­زایی رویان

۱-۱-۳-۱     جدایی دو رده­ی سلولی تروفواکتودرم و توده سلولی داخلی

۱-۱-۳-۲     جدایی دو رده­ی سلولی اپی­بلاست و اندودرم اولیه

۱-۲     تکنیک­های کمک باروری

۱-۲-۱     لقاح آزمایشگاهی

۱-۲-۱-۱      کیفیت سلول تخم

۱-۲-۲     کشت آزمایشگاهی رویان

۱-۲-۳     انجماد

۱-۲-۳-۱     اصول انجماد

۱-۲-۳-۲     مواد سرما محافظ

۱-۲-۳-۳     روش­های انجماد

۱-۲-۳-۳-۱     انجماد آهسته

۱-۲-۳-۳-۲     انجماد شیشه­ای

۱-۲-۴     سوراخ کردن مصنوعی

۲     مواد و روش­ها

۲-۱     حیوان

۲-۲     تولید رویان آزمایشگاهی۲۶

۲-۲-۱     استحصال اسپرم

۲-۲-۱-۱     آماده­سازی محیط و قطره­ها

۲-۲-۱-۲     جابجایی مهره­ی گردنی

۲-۲-۱-۳     تشریح موش نر و جداسازی اپیدیدیم

۲-۲-۱-۴     جمع­آوری و ظرفیت­پذیری اسپرم

۲-۲-۲     استحصال تخمک

۲-۲-۲-۱     تحریک تخمک­گذاری

۲-۲-۲-۱-۱      تزریق داخل صفاقی

۲-۲-۲-۲     آماده­سازی محیط و قطره­ها

۲-۲-۲-۳     جابجایی مهره­ی گردنی

۲-۲-۲-۴     تشریح موش ماده و جداسازی لوله­ی تخم­بر

۲-۲-۲-۵     جداسازی توده­ی تخمک-کومولوس

۲-۲-۳     لقاح آزمایشگاهی

۲-۲-۳-۱     آماده­سازی محیط و قطره­ها

۲-۲-۳-۲     لقاح

۲-۲-۴     کشت آزمایشگاهی

۲-۲-۴-۱     آماده­سازی محیط و قطره­ها

۲-۲-۴-۲     کشت رویان

۲-۳     تولید رویان درون­تنی

۲-۳-۱     تحریک تخمک­گذاری و جفت اندازی موش­ها

۲-۳-۲     آماده­سازی محیط و قطره­ها

۲-۳-۳     جابجایی مهره­ی گردنی

۲-۳-۴     تشریح موش ماده و جداسازی لوله­های رحمی

۲-۳-۵     استحصال بلاستوسیست

۲-۴     سوراخ کردن مصنوعی بلاستوسیست

۲-۴-۱     آماده­سازی محیط و قطره­ها

۲-۴-۲     آماده­سازی و تنظیم دستگاه ریز­دستکاری

۲-۴-۳     روش کار

۲-۵     انجماد رویان

۲-۵-۱     انجماد شیشه­ای

۲-۵-۱-۱     آماده­سازی محیط و قطره­ها

۲-۵-۱-۲

۰۲/۰۵/۲۰۰۲

۲-۵-۲-۱     آماده­سازی محیط و قطرات

۲-۵-۲-۲

۲-۶     بررسی بیان ژن۴۵

۲-۶-۱     استخراج RNA از بلاستوسیست

۲-۶-۲     ساخت cDNA

۲-۶-۳      طراحی پرایمر

۲-۶-۴     رقیق­سازی پرایمرها

۲-۶-۵     واکنش زنجیرهای پلیمراز

۲-۶-۶     ژل الکتروفورز محصولات PCR

۲-۶-۷     واکنش زنجیرهای پلیمراز در زمان واقعی

۲-۷     طراحی آزمایش

۲-۷-۱     کاهش مایع بلاستوسل رویان­های درون­تنی موش، قبل از انجماد شیشه­ای۵۲

۲-۷-۲     کاهش مایع بلاستوسل رویان­های برون­تنی موش، قبل از انجماد شیشه­ای۵۲

۲-۷-۳     آنالیز آماری

۳     نتایج

۳-۱     کاهش مایع بلاستوسل رویان­های درون­تنی موش قبل از انجماد  شیشه­ای

۳-۱-۱     نرخ زنده­مانی و خروج از زونا

۳-۱-۲     بیان نسبی ژن­های Gata6 و Grb2

۳-۱-۲-۱     واکنش زنجیرهای پلیمراز

۳-۱-۲-۲     واکنش زنجیرهای پلیمراز در زمان واقعی

۳-۲      کاهش مایع بلاستوسل رویان­های برون­تنی موش قبل از انجماد  شیشه­ای

۳-۲-۱     نرخ زنده­مانی و خروج از زونا

۳-۲-۲     بیان نسبی ژن­های Gata6 و Grb2