جداسازی هم زمان ژن‏های عامل مقاومت افزایش یافته به آمینوگلیکوزیدها

فصل اول – مقدمه

۱-۱- بیان مسأله

۱-۲- ضرورت انجام تحقیق

۱-۳-اهداف تحقیق

۱-۴-فرضیه‏ها

۱-۵-تعریف واژه‏ها

فصل دوم – مروری بر تحقیقات انجام شده

۲-۱-تاریخچه باکتری انتروکوک

۲-۲-تاکسونومی

۲-۳-فاکتورهای بیماری زایی

۲-۳-۱-مواد تجمعی

۲-۳-۲-سیتولیزین

۲-۳-۳-ژلاتیناز

۲-۳-۴-فرمون

۲-۳-۵-لیپوتیکوئیک اسید

۲-۳-۶-همولیزین انتروکوکوس فکالیس

۲-۳-۷-آنتی ژن آندوکاردیتی انتروکوکوس فکالیس

۲-۳-۸-پروتئین سطحی انتروکوکی (ESP )

۲-۳-۹-ادهسین کلاژن انتروکوکوس فکالیس (ACE )

۲-۴-بیماری زایی

۲-۴-۱-باکتریمی

۲-۴-۲-عفونت های مجاری ادراری

۲-۴-۳-اندوکاردیت

۲-۴-۴-عفونت های داخل شکمی، لگنی وبافت های نرم

۲-۴-۵-سایر عفونت های انتروکوکی

۲-۵-شناسایی انترکوک‏ها

۲-۶-درمان انترکوک‏ها

۲-۶-۱-مقاومت آنتی بیوتیکی

۲-۶-۱-۱-مقاومت به گلیکوپپتیدها

۲-۶-۱-۱-الف- عوامل زمینه ساز کلنیزاسیون انتروکوک های مقاوم به ونکومایسین(VRE)

۲-۶-۱-۲-مقاومت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام

۲-۶-۱-۳-مقاومت به آنتی بیوتیک های تتراسایکلین

۲-۶-۱-۴-مقاومت به لینکوزامیدها

۲-۶-۱-۵-مقاومت به استرپتوگرامین B وA

۲-۶-۱-۶-مقاومت به اگزازولیدون

۲-۶-۱-۷-مقاومت به اورنی مایسین

۲-۶-۱-۸-مقاومت در برابر آنتی بیوتیک های ماکرولیدی

۲-۶-۱-۹-مقاومت به کلرامفنیکل

۲-۶-۱-۱۰-مقاومت به آمینوگلیکوزیدها

۲-۶-۱-۱۰-الف- تاریخچه روند گسترش مقاومت های آمینوگلیکوزیدی

۲-۶-۱-۱۰-ب- انواع مقاومت به آمینوگلیکوزیدها

۲-۶-۱-۱۰-پ- اهمیت مقاومت آمینوگلیکوزیدی

۲-۶-۱-۱۰-ت-HLAR و و افزایش مرگ ومیر

۲-۶-۲-مقاومت چنددارویی( MDR)

۲-۷- روش های شناسایی سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک

۲-۷-۱- روش های مبتنی بر فنوتیپ

۲-۷-۱-۱- روش انتشار دیسک در آگار( دیسک دیفیوژن)

۲-۷-۱-۲- روش تهیه رقت در محیط مایع( براث دیلوشن )

۲-۷-۱-۳ – روش تهیه رقت در محیط آگار( آگار دیلوشن )

۲-۷-۲- روش های مبتنی بر ژنوتیپ

۲-۷-۲-۱-Triplex-PCR

۲-۷-۲-۱-الف-طراحی واجرایTriplex-PCR

۲-۷-۲-۱-ب-تیتراسیون اجزای واکنش

۲-۷-۲-۱-۳ -شرایط ترموسایکلر

۲-۸-اپیدمیولوژی عفونت های انتروکوکی

۲-۹-مروری بر پیشینه پژوهش

فصل سوم – مواد و روش‏ها

۳-۱-وسایل موردنیاز

۳-۲-مواد موردنیاز

۳-۳-طریقه ساخت محیط های کشت

۳-۳-۱-محیط بلادآگار

۳-۳-۲-محیط BHI براث

۳-۳-۳-محیط مولر هینتون آگار

۳-۳-۴-محیط پایه قند

۳-۴-جمع آوری نمونه

۳-۵-جدا سازی سویه ها

۳-۶-نگهداری سویه ها

۳-۷-آنتی بیوگرام

۳-۷-۱-تهیه سوسپانسیون باکتریایی

۳-۷-۲-روش آنتی بیوگرام

۳-۸-بررسی مقاومت افزایش یافته به جنتامایسین و استرپتومایسین

۳-۹-اجرای PCR

۳-۹-۱-آماده سازی واستخراج ژنوم

۳-۹-۱-۱-جوشاندن

۳-۱۰-اندازه گیری غلظت DNA ژنومیک تخلیص شده

۳-۱۱-الکتروفورز محصول استخراج ژنوم

۳-۱۲-انتخاب و سنتز پرایمر

۳-۱۳-روش آماده سازی پرایمرها

۳-۱۳-۱-محلول کاری پرایمر PCR

۳-۱۳-۲- ترکیب واکنش PCR برای هر نمونه

۳-۱۴-انجام واکنش PCR

۳-۱۵-طریقه ساخت بافر

۳-۱۵-۱-تهیه بافر(SX )TBE

۳-۱۵-۲-تهیه ژل Buffer  Loading  Gel

۳-۱۶-تهیه ژل الکتروفورز

۳-۱۶-۱-تهیه‌ی ژل آگاروز جهت انجام الکتروفورز  ژنوم اسنخراج شده و محصول PCR

۳-۱۷-تعیین توالی

فصل چهارم – نتایج و بحث

۴-۱-نتایج مربوط به جداسازی گونه های انتروکوکی از نمونه های بالینی

۴-۲-نتایج حاصل از کشت انتروکوک ها بر روی محیط و رنگ آمیزی گرم

۴-۳-نتایج حاصل از حساسیت آنتی بیوتیکی به روش دیسک دیفیوژن

۴-۴-نتایج حاصل از استخراج

۴-۵-نتایج PCR

۴-۶-بحث

فصل پنجم – نتیجه‏ گیری

۵-۱- نتیجه‏گیری

۵-۲-پیشنهادات

منابع فارسی