بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با ژن های pap و sfa کد کننده پیلی های P و S

عفونت دستگاه ادراری یکی از شایعترین عفونت های بیمارستانی است که از کلونیزه شدن اشرشیا کلی یوروپاتوژن در اپیتلیوم مخاطی میزبان ناشی می شود و به بافت میزبان آسیب می رساند. ساختارهای مختلف سطح سلولی در تشکیل بیوفیلم در اشرشیاکلی یوروپاتوژن دخیل هستند. از جمله فاکتورهای سطحی در اتصال باکتری و تشکیل بیوفیلم، پیلی P و S می باشد. هدف از این مطالعه تعیین میزان مقاومت آنتی بیوتیکی ، بررسی تشکیل بیوفیلم اشریشیا کلی یوروپاتوژن، سنجش قدرت اتصالی یا خاصیت هیدروفوبیسیتی آن و بررسی وجود ژن های فیمبریه ای pap وsfa و ارتباط آنها در تشکیل بیوفیلم بود.در این تحقیق تعداد ۱۰۰ نمونه از کشت باکتری بیماران مشکوک به عفونت دستگاه ادراری (UTI) جمع آوری گردید. با استفاده از تست های بیوشیمیایی متداول E.coli بودن ۷۰ نمونه تایید گردید. مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با استفاده از روش Kirby – Bauer مورد بررسی قرار گرفت. تشکیل بیوفیلم این باکتری با روش میکروتیترپلیت بررسی شد. به منظور بررسی اتصال باکتری  و میزان هیدروفوبیسیتی ، روش هیدروکربن اکتان استفاده شد. پس از استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج، حضور ژن های pap و sfa  به روش Multiplex PCR مورد بررسی گرفت.از مجموع ۱۰۰ نمونه مورد بررسی به کمک روش های بیوشیمیایی متداول ۷۰ نمونه به عنوان اشریشیا کلی یوروپاتوژن شناسایی شدند. نتایج نشان دادن  که این باکتری با هیدروفوبیسیتی ۲۳%  توانایی تشکیل بیوفیلم را دارد. از نظرمیزان تشکیل بیوفیلم ۸۶% قدرت بسیار کم، ٨/٢ ٪ قدرت متوسط و ٢/١١٪ دارای قدرت بسیار بالا نشان دادند. همچنین بر اساس نتایج بدست آمده از آزمایش Multiplex PCR بر روی ۱۰ نمونه ای که بالاترین قدرت تشکیل بیوفیلم را داشتند، ۱۰نمونه (۱۰۰٪) واجد ژن pap، ۷ نمونه (۷۰٪) واجد ژن sfa و ۷ نمونه (۷۰٪) نیز به طور همزمان دارای ژن pap و sfa بودند.

نوع فایل :word

تعداد صفحات:۸۱

*———————————–*

فصل اول: کلیات تحقیق

مقدمه

فصل دوم: مروری بر تحقیقات گذشته

٢ـ١ـ اشریشیا کلی یوروپاتوژن  (Uropathogenic E.coli; UPEC)

٢ـ٢ـ  فاکتور های بیماری زای تولید شده توسط UPEC

٢ـ٢ـ١ـ  ادهسین ها و فاکتور های موثر در کلونیزاسیون

١_٢_٢_١_  پیلی یا فیمبریه (Fimbriae)

٢_٢_٢_١_ فیمبریه نوع

٣_٢_٢_١_ فیمبریه P

۴_٢_٢_١_ فیمبریه S

۵_٢_٢_١_  تاژک و تحرک

۶_٢_٢_١_  Curli

٧_٢_٢_١_   پیلی F جنسی

٢ـ٢ـ٢ـ توکسین ها

١_٢_٢_٢_ آلفا همولیزین

٢_٢_٢_٢_ فاکتور نکروز دهنده سیتوتوکسیک (CNF_1)

٢ـ٢ـ٣ـ  بقاء و فرار از سیستم ایمنی

١_٢_٢_٣_ سیدروفور ها  (آئروباکتین)

٢_٢_٢_٣_  کپسول پلی ساکاریدی

٣_٢_٢_٣_ تشکیل  بیوفیلم

٢ـ٣ـ  عفونت های مجاری ادراری( Urinary Tract Infection; UTI)

٢ـ٣ـ١ـ نقش پیلی در عفونت های مجاری ادراری

٢ـ۴ـ بیوفیلم ها

٢ـ۴ـ١ـ توسعه بیوفیلم

٢ـ۴ـ٢ـ مقاومت آنتی بیوتیکی در بیوفیلم ها

٢ـ۴ـ٣ـ بررسی ارتباط بین تشکیل بیوفیلم، فاکتورهای یوروویرولان و مقاومت ضد میکروبی

٢ـ۵ـ نقش آب گریزی (Hydrophobicity) در اتصال باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن

فصل سوم : مواد و روش ها

٣ـ١ـ  مواد و وسایل

٣ـ١ـ١ـ محیط های کشت استفاده شده

٣ـ١ـ٢ـ مواد شیمیایی

٣ـ١ـ٣ـ کیت ها

٣ـ١ـ۴ـ دستگاه ها

٣ـ٢ـ  جمع آوری نمونه ها

٣ـ٣ـ جداسازی و خالص سازی

٣ـ۴ـ مشاهده میکروسکوپی

٣ـ۵ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتریUPEC

٣ـ۶ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت

٣ـ٧ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان

٣ـ٨ـ استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج DNA شرکت سینا ژن

٣ـ٩ـ تعیین کیفیت DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز

٣ـ١٠ـ PCR  چند گانه (Multiplex PCR)

٣_١١_ الکتروفورز ژل آگارز

فصل چهارم: نتایج

۴ـ١ـ آزمایشات تشخیصی برای تعیین اشریشیا کلی یوروپاتوژن  (UPEC)

۴ـ٢ـ فراوانی باکتریهای بیماریزای جدا شده از ادرار

۴ـ٣ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC

۴ـ۴ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت

۴ـ۵ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان

۴ـ۶ـ PCR  چند گانه (Multiplex PCR)

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

۵ـ١ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC

۵ـ٢ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت

۵ـ٣ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان

۵ـ۴ـ PCR  چند گانه (Multiplex PCR)

نتیجه گیری

پیشنهادات