بررسی مقاومت نسبت به نالیدیکسیک اسید و مطالعه مولکولی آن در سویه های شیگلا جدا شده از موارد بالینی در تهران

فصل اول:کلـیات تحقیق

۱-  مقدمه

۱-۱  بیان مسئله

۱-۲  کلیات

۱-۲-۱  باکتریولوژی شیگلا

۱-۲-۲  طبقه بندی شیگلا

۱-۲-۳  فاکتورهای ویرولانس شیگلا

۱-۲-۴  توصیف علائم بیماری ناشی از عفونت با شیگلا

۱-۲-۵  اپیدمیولوژی

۱-۲-۶  تشخیص آزمایشگاهی

۱-۲-۶-۱  کشت

۱-۲-۶-۲  تست های بیوشیمیایی

۱-۲-۶-۳  روش های مولکولی(PCR )

۱-۲-۷  کنترل و پیشگیری

۱-۲-۷-۱ بهداشت فردی

۱-۲-۷-۲   واکسن ها

۱-۲-۸  درمان

۱-۲-۸-۱    مقاومت دارویی و اهمیت آن در شیگلا

۱-۲-۸-۲  تاریخچه استفاده از کینولون ها و فلوروکینولون ها به عنوان آنتی بیوتیک

۱-۲-۸-۳  کاربرد فلوروکینولون ها در درمان عفونت های انسانی

۱-۲-۸-۴  مکانیسم عمل کینولون ها

۱-۲-۸-۴-۱  آنزیم DNA جیراز

۱-۲-۸-۴-۱-۱  نقش آنزیم DNA جیراز سلول های باکتریایی

۱-۲-۸-۵   مقاومت به فلوروکینولون ها

۱-۲-۸-۵-۱ موتاسیون در ژن های شیگلا

۱-۲-۸-۵-۲ تغییرات در توپوایزومراز IV

۱-۲-۸-۵-۳  مقاومت وابسته به پلاسمید

۱-۲-۸-۵-۴  کاهش جذب و تغییرات در افلوکس پمپ ها

۱-۲-۸-۵-۵  تغییرات در غشاء خارجی

۱-۲-۹ عوارض فلوروکینولون ها

۱-۳  اهداف تحقیق

۱-۳-۱  هدف کلی تحقیق

۱-۳-۲  اهداف جزئی تحقیق

۱-۳-۳  هدف کاربردی

۱-۳-۴  فرضیات

۳-۶  تعاریف واژه ها

فصل دوم: مروری بر تحقیقات انجام شده

۲-۱ مروری بر تحقیقات انجام شده

فصل سوم:مواد وروش ها

۳-۱- دستگاه‌ها، تجهیزات و مواد مورد استفاده

۳- ۱- ۱-  فهرست وسایل به کار گیری شده

۳- ۱- ۲-  فهرست مواد به کار گیری شده

۳- ۱- ۳- ترکیبات و محلول های مورد نیاز و فرمول ساخت

۳-۲- روش مطالعه و اجرای طرح

۳- ۲- ۱- نوع مطالعه

۳- ۲- ۲-  جامعه مورد مطالعه

۳- ۲ – ۳- تعداد نمونه های  مورد استفاده

۳-۲–۴- روش تجزیه و تحلیل داده ها

۳- ۲- ۵- ملاحظات اخلاقی

۳- ۲- ۶- مشکلات و محدودیت ها

۳- ۲ – ۷- جمع آوری اطلاعات بیماران

۳- ۳- انجام امور باکتریولوژیک

۳- ۳ – ۱-کشت، جداسازی و تعیین هویت باکتریها

۳- ۳ – ۲-بررسی حساسیت آنتی بیوتیکی

۳- ۳ – ۳- روش تعیین حساسیت باکتری ها نسبت به آنتی بیوتیک

۳- ۳ -۳- ۱-تهیه ی محیط کشت

۳- ۳ -۳- ۲-تهیه ی سوسپانسیون میکروبی

۳- ۳ -۳- ۳-مرحله دیسک گذاری

۳- ۴- انجام آزمایشات مولکولی

۳- ۴ – ۱- استخراجDNA  باکتری

۳- ۴ – ۱- ۱-کشت

۳- ۴ – ۱- ۲- جداسازی رسوب باکتری

۳- ۴ – ۱- ۳- نگه داری  DNA استخراج شده

۳- ۴ – ۱- ۴- اندازه گیری مقدار DNA  استخراج شده

۳- ۴ – ۲- پرایمر های مورد استفاده جهت شناسایی ژنهای gyrA

۳ -۴-۲–۱- طراحی و سنتز پرایمر و بررسی کیفیت پرایمر ها

۳-۴-۳- PCR

۳-۴-۳-۱-گرادیانت دمایی جهت بدست آوردن دمای اتصال

۳-۴–۳-۱- بررسی جهش ای احتمالی بر روی ژن gyrA با استفاده ازPCR-RFLP  پرایمر (L وD)

۳-۴–۴- الکتروفورز

۳-۴-۴–۱- الکتروفورز محصول  PCR

۳-۴-۴–۲- رنگ آمیزی ژل و عکس برداری

۳-۴-۵- ترادف یابی

فصل چهارم:نتایج تحقیق

۴- ۱- نتایج کشت جداسازی و تعیین هویت باکتری ها و اطلاعات مربوط به بیماران

۴-۲- فراوانی بیماران بر اساس سن و سال و جنس

۴-۳- نتایج مربوط به توزیع سرو گروه های شیگلا

۴-۴- نتایج  مربوط به حساسیت آنتی بیوتیکی

۴-۵- نتایج آزمون PCR  برای شناسایی ژنgyrA  در سویه های مقاوم نسبت به نالیدیکسیک اسید

۴-۶- انجام آزمون روی سایر ایزوله ها توسط Primer L

۴-۷- بررسی جهش های احتمالی بر روی ژن gyrA با استفاده از PCR-RFLP

۴-۸- انجام آزمون روی سایر ایزوله ها  توسط Primer D

۴-۹- بررسی جهش های احتمالی بر روی ژن gyrA با استفاده از PCR-RFLP

۴ – ۱۰- نتایج مربوط به بررسی وجود ژنهای qnrA، qnrB، qnrS در نمونه های بالینی  شیگلا

۴ – ۱۱- نتایج تعین توالی

فصل پنجم:بحث و نتیجه گیری

۵-۱ بحث و نتیجه‌گیری