بررسی تاثیر داروی بلئومایسین بر توان باروری و پارامترهای اسپرمی در موش های صحرایی نر

 

۱-۱) مقدمه:

۲-۱) کلیات

۳-۱) دستگاه تولید مثل نر در پستانداران

۱-۳-۱) بیضه

۱-۳-۱-۱) ساختمان بیضه و اپی دیدیم

۱-۳-۱-۲) آپاندیس بیضه و آپاندیس اپی دیدیم

۱-۳-۱-۳) غلافهای بیضه

۱-۳-۱-۴) تونیکا واژینالیس

۱-۳-۱-۵) تونیکا آلبوژینا

۱-۳-۱-۶) تونیکا واسکولوزا

۱-۳-۱-۷) عصب گیری بیضه

۱-۳-۲) مجرای دفران

۱-۳-۲-۱) ساختمان مجرای دفران

۱-۳-۲-۲) عصب گیری

۱-۳-۳) مجاری ابرنت

۱-۳-۴) پارادیدیم

۱-۳-۵) طناب اسپرماتیک

۱-۳-۶) اسکروتوم یا کیسه بیضه

۱-۳-۶-۱) عصب گیری

۱-۳-۷) سمینال وزیکولها

۱-۳-۷-۱) ساختمان سمینال وزیکول

۱-۳-۷-۲) عصب گیری

۱-۳-۸) مجرای انزالی

۱-۳-۸-۱) ساختمان

۱-۳-۹) پروستات

۱-۳-۹-۱) ساختمان پروستات

۱-۳-۹-۲) لوب های پروستات

۱-۳-۹-۳) عصب گیری

۱-۳-۱۰)غدد بولبواورترال

۱-۳-۱۰-۱) ساختمان

۱-۴) سلول های سری اسپرماتوژنز

۱-۵) سلولهای پشتیبان یا سرتولی

۱-۶) اسپرماتوژنز

۱-۶-۱) اسپرماتوسیتوژنز

۱-۶-۲) میوز

۱-۶-۳) اسپرمیوژنز

۱-۷) مورفولوژی اسپرم

۱-۷-۱) سر اسپرم

۱-۷-۲) دم اسپرم

تصویر ۱-۱٫ ساختمان طبیعی اسپرم انسان (Parsiteb, 2013)

۱-۷-۳) اسپرم های غیر طبیعی

تصویر ۲-۱ انواع شکل های اسپرم(blogfa, 2013)

۱-۸) سرنوشت و اعمال آندروژن ها

۱-۸-۱) آندروژن های داخل بیضه ای

۱-۸-۲) تبدیل محیطی استروژن

۱-۸-۳)تبدیل محیطی دی هیدروتستوسترون

۱-۸-۴) اعمال محیطی تستوسترون

۱-۸-۵) مکانیسم عمل آندروژن

۱-۸-۶) انتقال و متابولیسم آندروژن ها

۱-۸-۷) محور  هیپوتالاموس- هیپوفیز- بیضه

تصویر۱-۳: محور هیپوتالاموسی- هیپوفیزی- بیضه ای (Bern et al, 2010)

۱-۹) بلئومایسین

۱-۹-۱)  تاریخچه و ساختمان شیمیایی بلئومایسین

تصویر ۱-۴: ساختمان شیمیایی بلئومایسین(Umenzawa et al, 1966 ).

۱-۹-۲) مکانیسم  اثر بلئومایسین:

تصویر ۱-۵: مکانسم عمل بلئومایسین(Nature, 2013)

۱-۹-۳) کاربردهای بالینی

۱-۱۰) استرس اکسیداتیو

۱-۱۰-۱) گونه های فعال اکسیژن(ROS):

۱-۱۰-۲) پیامدهای استرس اکسیداتیو در دستگاه تولید مثلی نر:

تصویر ۱-۶: پیامدهای استرس اکسیداتیو در دستگاه تولید مثلی نر(Clevelandclinic, 2013)

۱-۱۱) آنتی اکسیدانت ها و نقش حفاظتی آنها در برابر استرس اکسیداتیو:

۱-۱۲) سنجش استرس اکسیداتیو

۱-۱۲-۱) مالون دی آلدئید (MDA)

۱-۱۲-۲) گلوتاتیون احیا (GSH)

۱-۱۲-۳) آنزیم کاتالاز

۱-۱۳) ژل رویال

۱-۱۳-۲) طریقه نگهداری

۱-۱۳-۳) خواص فیزیکی ژل رویال

۱-۱۳-۴) خواص درمانی ژل رویال

۱-۱۳-۴-۱) خاصیت میکروب کشی

۱-۱۳-۴-۲) کاهش فشار خون

۱-۱۳-۴-۳) جلوگیری از تصلب شرائین

۱-۱۳-۴-۴) جوانی و شادابی پوست و ضد پیری

۱-۱۳-۴-۵) خاصیت ضد سرطانی

۱-۱۴) تولیدمثل در موشهای صحرایی :

۱-۱۴-۱) بلوغ :

۱-۱۴-۲) رفتار تولیدمثلی :

۱-۱۴-۳) دستگاه تولیدمثلی موشهای صحرایی نر :

تصویر ۱-۷: دستگاه تولیدمثلی موشهای صحرایی نر(Russell, 1992).

۱-۱۵) تولید جنین در شرایطIn Vivo

۱-۱۵-۱) آمیختن گامت ها

۱-۱۶) تولید جنین در شرایط آزمایشگاهی

۱-۱۶-۱) ظرفیت پذیری اسپرم

۱-۱۶-۲) لقاح آزمایشگاهی (IVF)

۲-۱) مواد و تجهیزات مورد نیاز

۲-۲) حیوانات مورد مطالعه:

۲-۲-۱) تعیین دوز مؤثر دارو و حیوانات

۲-۲-۲) گروه بندی حیوانات:

۲-۳) نمونه برداری

۲-۴) مراحل تهیه مقاطع بافتی

۲-۴-۱)  آبگیری (dehydration)

۲-۴-۲) شفاف سازی (clearing)

۲-۴-۳) نفوذ و آغشتگی

تصودر ۲-۱: مراحل قالب گیری بافت(Istockphoto, 2013)

۲-۴-۵) برش بافت و ثابت کردن مقاطع بافتی بر روی لام

۲-۴-۶) رنگ آمیزی مقاطع بافتی

۲-۴-۶-۱) رنگ آمیزی آهن وایگرت

۲-۵)  آماده سازی موش برای IVF

۲-۵-۱) آماده سازی محیط کشت برای IVF

۲-۵-۲) طرز تهیه محیط کشت  mR1ECM:

۲-۵-۳) آماده سازی اسپرم :

۲-۵-۴) روش گرفتن تخمک بالغ و لقاح داخل آزمایشگاهی(IVF):

۲-۵-۴-۱) لقاح داخل آزمایشگاهی (IVF):

۲-۵-۴-۲) ارزیابی رشد جنین ها:

۲-۲: مراحل انجام پروسه IVF

. ۲-۶) ارزیابی هیستومورفومتریک بیضه

۲-۷) ارزیابی فاکتور های مختلف بافت بیضه

۲-۷-۱)  ضریب تمایز لوله ای (TDI)

۲-۷-۲) ضریب اسپرمیوژنز (SPI)

۲-۷-۳) ضریب سلول سرتولی (SCI)

۲-۷-۴) ضریب میوزی (MI)

۲-۸) ارزیابی خصوصیات اسپرم ها

۲-۸-۱)  نحوه استحصال اسپرم از اپیدیدم

۲-۸-۲) شمارش اسپرمها :

۲-۸-۳) ارزیابی قابلیت زنده ماندن اسپرم ها

۲-۸-۴) بررسی تحرک اسپرماتوزوئیدها

۲-۸-۵) بررسی وضعیت بلوغ هسته اسپرم: رنگ آمیزی آنیلین بلو (AB)

۲-۸-۶)  بررسی DNA شکسته و یا تک رشته ای: رنگ آمیزی آکریدین اورانژ (AO)

۲-۹) سنجش فاکتورهای بیوشیمیایی

۲-۹-۱)  روش اندازه گیری مالون دی آلدئید :

۲-۹-۲) روش اندازه گیری قدرت آنتی اکسیدانی کل(FRAP):

۲-۹-۳) روش اندازه گیری فعالیت آنزیم کاتالاز:

۲-۱۰) اندازه گیری تستوسترون سرمی

۲-۱۱) مطالعات هیستوشیمیایی بیضه

۲-۱۱-۱) رنگ آمیزی آهن وایگرت

۲-۱۱) آنالیز و تحلیل داده ها

۳-۱) نتایج حاصل از ارزیابی خصوصیات اسپرم

۳-۱-۱) نتایج حاصل از بررسی تعداد اسپرم

نمودار ۳-۱: مقایسه میانگین تعداد اسپرم ها در گروه های تحت تیمار(* اختلاف معنی دار با گروه کنترل و گروه ژل رویال ( p<0.05)؛ # اختلاف معنی دار با گروه داروی بلئومایسین(p<0.05))

۳-۱-۲) نتایج حاصل از مطالعه میزان اسپرم زنده

تصویر ۳-۱: اسپرم زنده(۱) با سر بدون رنگ و  اسپرم مرده با سر صورتی(۲)، رنگ آمیزی ائورین(E&N ×۴۰۰).

نمودار۳-۲ درصد اسپرم های زنده در گروه های تحت تیمار(* اختلاف معنی دار با گروه کنترل و  گروه ژل رویال ( p<0.05)، # اختلاف معنی دار با گروه داروی بلئومایسین(p<0.05))

۳-۱-۳)نتایج حاصل از مطالعه میزان تحرک اسپرم

۳-۱-۴) نتایج بررسی وضعیت بلوغ هسته اسپرم

۳-۱-۵) نتایج حاصل از مطالعه DNA اسپرم

۳-۲) یافته های بیوشیمیایی

۳-۲-۱) نتایج حاصل از بررسی میزان مالون دی آلدئید

۳-۲-۲) نتایج حاصل از اندازه گیری ظرفیت آنتی اکسیدانی کل

۳-۲-۳) نتایج حاصل از اندازه گیری فعالیت آنزیم کاتالاز

۳-۲-۴) نتایج حاصل از بررسی سطح تستوسترون

۳-۳) نتایج بررسی های بافت شناسی بافت بیضه

۳-۳-۱) یافته های مورفولوژیک در بافت بیضه

۳-۳-۲) یافته های هیستومورفومتریک در بافت بیضه

۳-۳-۲-۱) نتایج حاصل از اندازه گیری قطر لوله های سمینیفر

۳-۳-۳) نتایج حاصل از ارزیابی های اسپرماتوژنز  در بافت بیضه

۳-۳-۳-۱) نتایج حاصل از محاسبه ضریب اسپرمیوژنز

۳-۳-۳-۲) نتایج حاصل از ضریب سلول های سرتولی

۳-۳-۳-۳) نتایج حاصل از محاسبه ضریب تمایز لوله ای

۳-۳-۳-۴) نتایج حاصل ازاندازه گیری ضریب میوزی

۳-۴)  نتایج حاصل از مطالعه پارامترهای مختلف لقاح (IVF)

۳-۴-۱) نتایج حاصل از تعداد اووسیت های لقاح یافته در گروه های تحت تیمار

۳-۴-۲) نتایج حاصل از تعداد جنین های دو سلولی

۳-۴-۳) نتایج حاصل از تعداد بلاستوسیست

۳-۴-۴) نتایج حاصل از تعداد جنین های متوقف شده

۴-۱) تاثیر بلئومایسین و  ژل رویال بر فاکتورهای بیوشیمیایی

۴-۲) تاثیر بلئومایسین و ژل رویال بر میزان تحرک اسپرم:

۴-۳) تاثیر بلئومایسین و ژل رویال بر میزان ترشح تستوسترون

۴-۴) بررسی تاثیر بلئومایسین و ژل رویال بر بلوغ اسپرم

۴-۵) بررسی تاثیر بلئومایسین و ژل رویال بر کیفیت DNA  اسپرم

۴-۶) بررسی تاثیر بلئومایسین و ژل رویال بر هیستولوژی لوله های منی ساز

۴-۷)تاثیر بلئومایسین و ژل رویال بر قدرت باروری

۴-۸) نتیجه گیری:

۴-۹) پیشنهادات: