بررسی مقایسه ای پروفایل پروتئینی مایکوباکتریوم -توبرکلوزیس

فصل اول- مقدمه

۱-۱٫ کلیات سل

۱-۲٫ بیان مسئله

۱-۳٫ اهمیت و ضرورت

۱-۴٫ اهداف

فصل دوم- پیشینه تحقیق

۲-۱٫ تاریخچه

۲-۲٫ مایکوباکتریومها

۲-۳٫ طبقه ندی مایکو باکتریومها

۲-۳-۱٫ فتو کروموژن

۲-۳-۲٫ اسکوتوکروموژن

۲-۳-۳٫ غیر کروموژن

۲-۳-۴٫ سریع الرشد

۲-۴٫ باکتریولوژی سل

۲-۵٫ مورفولوژی و خصوصیات میکروسکوپی

۲-۶٫ خصوصیات رشد

۲-۷ . فیزیولوژی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

۲-۷-۱٫ انتقال مواد غذایی توسط غشاء خارجی

۲-۷-۲٫ انتقال توسط غشاء داخلی

۲-۷-۲-۱٫ انتقال ترکیبات حاوی کربن

۲-۷-۲-۲٫ انتقال ترکیبات غیر کربن

۲-۸٫ فاکتورهای ویرولانس

۱-۹٫ دیواره سلولی

۲-۱۰٫ بیوشیمی دیواره سلولی

۲-۱۱٫ بیماریزایی

۲-۱۱-۱٫ مکانیسم بیماریزایی

۲-۱۲٫ درمان سل

۲-۱۲-۱٫ درمان سل حساس به دارو

۲-۱۲-۲٫ درمان سل مقاوم به دارو

۲-۱۳٫ مقاومت دارویی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

۲-۱۴٫ مکانیسم مولکولی مقاومت دارویی

۲-۱۴-۱٫ مقاومت به ریفامپین

۲-۱۴-۲٫ مقاومت به ایزونیازید

۲-۱۴-۳٫ مقاومت به پیرازین آمید

۲-۱۴-۴٫ مقاومت به اتامبوتول

۲-۱۴-۵٫ مقاومت به استرپتومایسین

۲-۱۴-۶٫ فلورو کینولونها

۲-۱۴-۷٫ آمینوگلیکوزیدها

۲-۱۴-۸٫ سیکلوسرین

۲-۱۴-۹٫ پاراآمینوسالیسیلیک

۲-۱۵٫ انواع سل

۲-۱۵-۱٫ سل ریوی

۲-۱۵-۲٫ سل خارج ریوی

۲-۱۵-۲-۱٫ سل عقده¬های لنفاوی

۲-۱۵-۲-۲٫ سل پلور

۲-۱۵-۲-۳٫ سل استخوانی

۲-۱۵-۲-۴٫ سل سیستم عصبی مرکزی

۲-۱۵-۲-۵٫ سل شکمی

۲-۱۵-۲-۶٫ سل دستگاه تناسلی

۲-۱۵-۲-۷٫ سل پریکاردیت

۲-۱۵-۲-۸٫ سل ارزنی

۲-۱۶٫ سل در کودکان

۲-۱۷٫ سل و ایدز

۲-۱۸٫ روشهای تشخیص سل

۲-۱۸-۱٫ تست پوستی

۲-۱۸-۲٫ کشت

۲-۱۸-۳٫ تهیه اسمیر

۲-۱۸-۴٫ تکنیک PCR

۲-۱۸-۵٫ بررسی اینترفرون گاما

۲-۱۸-۶٫ رادیوگرافی ریه

۲-۱۹٫ اپیدمیولوژی

۲-۱۹-۱٫ وضعیت بیماری سل انسانی در ایران

۲-۲۰٫ مایکوباکتریوم بوویس

۲-۲۰-۱٫ اهمیت سل گاوی

۲-۲۱٫ مایکوباکتریوم بوویس ب.ث.ژ

۲-۲۱-۱٫ فیلوژنی

۲-۲۱-۲٫ تاریخچه BCG

۲-۲۱-۳٫ تاریخچه تولید و مصرف واکسن ب.ث.ژ در ایران

۲-۲۱-۴٫ ایمنی زایی

۲-۲۱-۵٫ لزوم طراحی واکسن جدید

۲-۲۲٫ پروتئومیکس مایکوباکتریومها

۲-۲۳٫ پیشینه تحقیق پروتئومیکس مایکوباکتریوم توبرکلوزیس و بوویس

فصل سوم- مواد و روشها

۳-۱٫ نمونه گیری

۳-۲٫ کشت و جداسازی باکتری

۳-۲-۱٫ مواد مورد نیاز برای تولید محیط لوون اشتاین جانسون به میزان ۵/۱ لیتر

۳-۲-۲٫ طرز تهیه محیط کشت

۳-۲-۳٫ آلودگیزدایی و تغلیظ نمونه ها

۳-۲-۳-۱٫ آماده سازی محلولها

۳-۲-۴٫ روش کار کشت

۳-۲-۴-۱٫ محیط کشت حاوی تیوفن ۲- کربوکسیلیک اسید هیدرازید

۳-۳٫ تشخیص میکروسکوپی مایکوباکتریوم¬ها

۳-۳-۱٫ تهیه گستره

۳-۳-۲٫ رنگ آمیزی اسید-فست فلورسنس اورامین O

۳-۳-۳٫ رنگـمیزی ذیل- نلسون

۳-۳-۴٫ رنگ آمیزی کینون (رنگ میزی سرد)

۳-۳-۵٫ بررسی و آزمایش گسترش

۳-۴٫ بررسی لوله های کشت

۳-۵٫ شناسایی و تعیین هویت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس و بوویس

۳-۵-۱٫ تست نیاسین

۲-۵-۱-۱٫ معرفها و مواد لازم تست نیاسین

۳-۵-۱-۲٫ آماده سازی محلولها ی نیاسین

۳-۵-۱-۳٫ مراحل کارتست نیاسین

۳-۵-۲٫ آزمونهای احیای نیترات

۳-۵-۲-۱٫ معرفها و مواد لازم تست نیترات

۳-۵-۲-۲٫ آماده سازی معرف های تست نیترات

۳-۵-۲-۳٫ مراحل انجام کار تست نیترات

۳-۵-۲-۴٫ استانداردهای احیاء نیترات

۳-۵-۳٫ تست کاتالاز

۳-۵-۳-۱٫ محیط و مواد مورد نیاز

۳-۵-۳-۲٫ آماده سازی محلولهای تست کاتالاز

۳-۵-۳-۳٫ مراحل انجام آزمایش روش نیمه کمی کاتالاز و کاتالاز ۶۸ درجه

۳-۵-۳-۴٫ نتایج و تفسیر آزمایش کاتالاز

۳-۵-۴٫ حساسیت به تیوفن ۲- کربوکسیلیک هیدرازید (TCH)

۳-۶٫ آزمایشات حساسیت داروئی در مایکوباکتریوم¬ها

۳-۶-۱٫ تهیه محلول استاندارد مک فارلند

۳-۶-۲٫ تهیه سوسپانسیون باکتری

۳-۷٫ کشت سویه های انتخابی در محیط میدل بروک ۷H9

۳-۷-۱٫ مواد مورد نیاز

۳-۷-۱-۱٫ آماده سازی محیط

۳-۷-۱-۲٫ انتحاب سویه ها و کشت

۳-۸٫ جمع¬آوری سویه ها میکروبی، استخراج و خالص سازی پروتئین

۳-۸-۱٫ استخراج پروتئینهای غشایی

۳-۸-۱-۱٫ مواد مورد نیاز

۳-۸-۱-۲٫ تهیه بافر و محلولها

۳-۸-۱-۳٫ روش کار

۳-۸-۱-۴٫ استخراج پروتئین¬های ترشحی

۳-۸-۲٫ خالصسازی پروتئین

۳-۸-۲-۱٫ مواد مورد نیاز

۳-۸-۲-۱-۱٫ آمادهسازی محلولها و مواد

۳-۸-۲-۱-۲٫ روش کار ترسب پروتئینهای غشایی

۳-۸-۲-۱-۳٫ ترسیب پروتئینهای ترشحی

۳-۸-۲-۲٫ تعیین غلظت پروتئینها

۳-۸-۲-۲-۱٫  مواد مورد نیاز

۳-۸-۲-۲-۲٫ آماده سازی محلول برادفورد

۳-۸-۲-۲-۳٫ روش کار

۳-۹٫ الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید(تک بعدی)

۳-۹-۱٫ مواد مورد نیاز

۳-۹-۲٫ آماده سازی مواد

۳-۹-۳٫ روش کار

۳-۹-۳-۱٫ رنگ آمیزی کوماسی بلو R-250

۳-۹-۳-۲٫ رنگآمیزی Blue Silver Staining

۳-۱۰٫ تصویر برداری و آنالیز ژلها

فصل چهارم- نتایج

۴-۱٫ جمعیت مورد مطالعه

۴-۲٫ درصد سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس جمع¬آوری شده از بیماران با توجه به موضع جداسازی

۴-۳٫ مشاهده لام رنگ آمیزی اسید-فست فلورسنس اورامین O

۴-۴٫ مشاهده لام رنگ آمیزی ذیل-نلسون

۴-۵٫ نتایج کشتها

۴-۶٫ آزمونهای بیوشیمیایی وحساسیت آنتی-بیوتیکی

۴-۷٫ نتایج تعیین غلظت پروتئینها

۴-۸٫ نتایج مربوط به تفکیک پروتئینها بر اساس وزن مولکولی

فصل پنجم- بحث و نتیجه گیری

پیشنهاد

منابع