بررسی میزان بیان ژن آلفا آمیلاز کبدی به روش Real time PCR در بافت کبد موش های نرمال و چاق

فصل  اول:  کلیات

۱-۱- بیان مسئله

۱-۲- اهداف پژوهش

۱-۳- فرضیات اصلی پژوهش

۱-۴۱- جنبه جدید بودن و نوآوری در تحقیق

فصل  دوم:  مروری بر مطالعات گذشته

۲-۱-آمیلاز

۲-۱-۱- تاریخچه

۲-۱-۲- آمیلاز در تکامل انسان

۲-۱-۳- کارکردهای آمیلاز

۲-۱-۴- ساختار آمیلاز

۲-۱-۵- اندازه گیری سطح خونی

۲-۲- آلفا آمیلاز

۲-۲-۱-کارکرد آلفاآمیلاز

۲-۲-۲- آلفا آمیلاز در فیزیولوژی انسان

۲-۳- آمیلاز بزاقی یا Ptyalin

۲-۳-۱- تنوع ژنتیکی در آمیلاز بزاقی

۲-۴- آلفا آمیلاز پانکراس

۲-۵- آلفا آمیلاز در پاتولوژی

۲-۵-۱- تفسیر میزان آلفا آمیلاز

۲-۶- بافر محدود کننده آلفا آمیلاز

۲-۷- مطالعه فعالیت آنزیم

۲-۷-۱- روشهای اندازه گیری فعالیت آلفاآمیلاز تا قبل از روش رنگ سنجی

۲-۷-۲ – روشهای رنگ سنجی :

۲-۸- معماری دمین های ساختار آلفا آمیلاز (Domain)

۲-۹- ژن های آلفا آمیلاز در انسان

۲-۱۰- آلفا آمیلاز در موش

۲-۱۰-۱-تفاوت توالی انتهای ۵ mRNA های آلفا آمیلاز کبدی و غدد بزاقی موش از لحاظ اندازه

۲-۱۰-۲- مطالعات مربوط به آنالیز توالی mRAN آلفا آمیلاز کبدی

۲-۱۰-۳- خصوصیات  mRAN آلفا آمیلاز کبدی

۲-۱۱- مهار کننده های آلفا آمیلاز

۲-۱۱-۱- چای سبز

۲-۱۱-۲- فواید چای سبز

۲-۱۱-۲-۱-جلوگیری از بیماری گرفتگی رگها

۲-۱۱-۲-۲-تاثیر چای سبز روی افراد مبتلاء به تری گلیسیرید

۲-۱۱-۲-۳-رقیق شدن خون و جلوگیری از لخته شدن آن

۲-۱۱-۲-۴-کاهش فشار خون و جلوگیری از ابتلاء به آن

۲-۱۱-۲-۵-حداقل رساندن میزان صدمات وارد شده به مغز و قلب

۲-۱۱-۲-۶-حفاظت در مقابل انواع سرطان

۲-۱۱-۲-۷-جلوگیری از دیابت نوع ۲

۲-۱۱-۲-۸-کاهش وزن

فصل سوم  مواد و روشها

۳-۱- روش های اجرایی کار :

۳-۱-۱- حیوان آزمایشگاهی مورد مطالعه :

۳-۱-۱-۱-دلایل انتخاب این حیوان به طور خلاصه عبارتند از :

۳-۱-۱-۲-شرایط نگه داری حیوانات :

۳-۱-۲- نوع مطالعه

۳-۲- روش اجرای طرح (چاق کردن موش ها با استفاده از رژیم غذایی با چربی بالا)

۳-۲-۱- تهیه عصاره ی آبی و الکلی چای سبز

۳-۲-۲- جدا سازی کبد و خونگیری از قلب موش

۳-۳- استخراج RNA

۳-۳-۱- وسایل کار استخراج  RNA

۳-۳-۲- مراحل استخراج    RNA

۳-۳-۲-۱-  رسوب دادن RNA :

۳-۳-۲-۲-  شستشوی RNA :

۳-۳-۲-۳-  خشک کردن رسوب RNA :

۳-۳-۳-  ارزیابی کمی و کیفی RNA استخراج شده:

۳-۳-۳-۱-  اندازه گیری مقدار RNA :

۳-۳-۳-۲- بررسی کیفی RNA :

۳-۳-۳-۳-  حفظ و نگهداری RNA:

۳-۴- بررسی بیان ژن

۳-۴-۱-  RT-PCR

۳-۴-۲-  تکثیر cDNA

۳-۴-۲-۱- PCR(Polymerase Chain Reaction)

۳-۴-۲-۲- مواد و وسایل مورد نیاز برای ساخت  cDNA

۳-۴-۲-۳- روش انجام آزمایش ساخت  cDNA

۳-۴-۲-۴- نحوه انجام واکنش RT-PCR   برای اطمینان از صحت سنتز cDNA

۳-۴-۲-۵- آشکار سازی محصولات PCR با الکتروفورز

۳-۴-۲-۶- دستگاههای مورد نیاز برای الکتروفورز

۳-۴-۲-۷- مواد لازم برای الکتروفورز

۳-۴-۲-۸- نحوه انجام الکتروفورز

۳-۴-۲-۹- آشکار سازی ژل

۳-۵- Real time PCR

۳-۵-۱- موارد استفاده از Real-time PCR

۳-۵-۲- فازهای مختلف یک واکنش Real time PCR

۳-۵-۳- روش‌های سنجش با Real-time PCR

۳-۵-۳-۱- روش غیر اختصاصی سنجش با Real-time PCR

۳-۵-۴- مفهوم Threshold وCt

۳-۵-۵- نحوه  رسم منحنی ذوب (Melt Curve Analysis)

۳-۵-۶- نحوه انجام Real time PCR

۳-۵-۶-۱- مواد لازم برای انجام  Real time PCR

۳-۵-۶-۲-روش انجام آزمایش Real time PCR

۳-۵-۶-۳- آنالیز آماری

۳-۶-اندازه گیری α-Amylase در سرم موش:

۳-۶-۱- جداسازی سرم از خون موش

۳-۶-۲- اندازه گیری α-Amylase در سرم روش فتومتریک

فصل چهارم  نتایج

۴-۱- مشاهدات افزایش وزن موش های گروه تست

۴-۲- تعیین کیفیت و غلظت RNA استخراج شده

۴-۳- بررسی کیفیت cDNA سنتز شده به وسیله PCR

۴-۴-آنالیز منحنی ذوب (Melt Curve Analysis)

۴-۴-۱- مقایسه بیان ژن liver alpha amylase در موش های چاق و نرمال

۴-۴-۲-اثر چای سبز بر بیان ژن liver alpha amylase بر روی موش های چاق

۴-۵- اندازه گیری آلفا آمیلازدر سرم به روش فتومتریک

فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری

۵-۱- بحث و نتیجه گیری

۵-۲-پیشنهادات