تشخیص برخی از سرووارهای سالمونلا انتریکا به کمک Multiplex PCR در موارد اسهالی ارجاعی به بیمارستانهای سبزوار

عفونت‌های سالمونلایی که عفونت های غذایی نامیده می‌شوند، ممکن است توسط هر یک از سرووارها ایجاد شود. معمولا باکتری عامل عفونت در ماده غذایی رشد می‌کند تا به مقدار قابل توجهی برسد. به این ترتیب احتمال عفونت افزایش یافته و موجب بروز بیماری در خانواده‌ها و گروه‌های بزرگ می‌شوند. سالمونلا و سروتیپ‌های آن منبع مهم آلودگی‌های غذایی انسان و عامل پاتوژن بسیار قوی و بیماری‌زا در انسان‌هاست. سالمونلا باکتری گرم منفی، متحرک و باسیلی شکل است که خصوصیات عمومی خانواده انتروباکتریاسه را داراست. امروزه بیش از ۲۴۵۰ سروتیپ سالمونلا شناسایی شده است که برخی از این سروتیپ‌ها عامل بیماری‌هایی از قبیل تب تیفوئید و انتروکولیت در انسان می‌باشند. در این مطالعه ۵۰ نمونه مدفوع افراد مبتلا به اسهال از سطح بیمارستان‌های شهرستان سبزوار جمع‌آوری گردید و با رعایت کامل موارد بهداشتی به آزمایشگاه تخصصی دانشگاه آزاد اسلامی واحد سبزوار منتقل شدند. برای جداسازی اولیه از محیط کشت‌های بافر پپتون واتر ، سلنیت F براث ،XLD و SS آگار استفاده گردید. جهت تایید تشخیص از تست‌های بیوشیمیایی نظیر TSI و اوره آگار و VP، اندول و سیمون سیترات و حرکت استفاده شد. در مطالعه حاضر ۱۰ مورد باکتری سالمونلا با استفاده از روش کشت میکروبی جدا شد. این در حالی است که با استفاده از روش مولکولی Multiplex PCR ، ۲۱ مورد باکتری سالمونلا در نمونه‌ها ردیابی گردید. بنابراین می‌توان گفت  که روش PCR نسبت به کشت میکروبی از دقت بالاتری برخوردار است و همچنین روش‌های سنتی کشت میکروبی اغلب زمان‌بر خسته‌کننده و پرهزینه است.

نوع فایل :word

تعداد صفحات :۱۰۶

*———————————–*

فصل اول مقدمه

مقدمه وهدف

فصل دوم مروری بر تحقیقات گذشته

خصوصیات سالمونلا

تاریخچه

طبقه بندی

خصوصیات ماکروسکوپیک و میکروسکوپیک

حساسیت به مواد شیمیایی

ساختار پادگنی سالمونلا

روش های طبقه بندی

شرایط رشد سالمونلا

بقا سالمونلا

منشا سالمونلا

آلودگی در انسان

میزان شیوع سالمونلوز در انسان

علائم سالمونلوز در انسان

دوز آلوده کننده

پیشگیری

سالمونلوز در حیوانات

سالمونلوز در پرندگان

آلودگی در طیور

میزان شیوع

روش های تشخیص سالمونلا

روش های کشت

روش سرولوژیکی

روش الایزا

روش آگلوتیناسیون به کمک لاتکس

روشPCR

جستجو وآنالیز محصولاتPCR

بهبود حساسیت و ویژگی تکثیرPCR

اجزای PCR

سابقه PCR در شناسایی سالمونلا

فصل سوم:مواد و روش ها

وسایل مورد استفاده

مواد مورد استفاده

گرد آوری نمونه های آزمایشی

مواد و وسایل لازم برای تهیه محیط

مواد و وسایل لازم جهت کشت نمونه

کشت در محیط جامد انتخابی

آزمون های بیوشیمیایی

کشت در محیط آهن دار سه قندی

آزمون اوره آز

آزمون وژس پروسکوئر

آزمون اندول

آزمون سیترات

آزمون حرکت

آزمون رنگ آمیزی گرم

تهیه گسترش روی لام

رنگ آمیزی با کریستال ویوله

مرحله شستشو

مرحله اضافه کردن محلول ید

مرحله رنگ بری با استفاده از استن – الکل

رنگ آمیزی با فوشین

خشک کردن لام

نکات مهمی که هنگام رنگ آمیزی گرم باید مورد توجه قرار گیرد

استخراج DNA

مواد و وسایل لازم

آزمون PCR

مواد و وسایل لازم

روش کار

الکتروفورز محصولاتPCR

مواد و وسائل لازم

تهیه بافر x

تهیه ژل آگاروز

بارگذاری محصولات PCR

مشاهده باند های روی ژل

مواد و وسایل لازم

فصل چهارم :نتایج

نتایج

کشت در محیط جامد انتخابی

کشت در محیط XLD

کشت در محیط سالمونلا شیگلا آگار

آزمون گرم

تست های بیو شیمیایی

آزمون TSI

آزمون اوره آز

آزمون  VP

آزمون اندول

آزمون سیترات

آزمون حرکت

استخراج DNA

استخراج توسط KOH / مولار

آزمونPCR

نتایج آزمون کای دو

فصل پنجم : بحث و پیشنهادات

بحث

نتیجه گیری نهایی

پیشنهادات