توسعه تست آویدیته الایزا با استفاده از پروتئینهای نوترکیب برای تمایز عفونت حاد از مزمن توکسوپلاسما

فصل اول: کلیات

۱-۱- اتصال ونفوذ توکسوپلاسما گوندی به سلول

۱-۲-راه انتقال

۱-۲-۱-مصرف مواد انگل آلوده به اووسیست

۱-۲-۲-مصرف گوشت حاوی کیست نسجی

۱-۲-۳-انتقال از طریق جفت

۱-۳- همه گیر شناسی عفونت توکسوپلاسمایی

۱-۳-۱-عوامل موثر در همه گیر شناسی توکسوپلاسما گوندی

۱-۳-۱-۱-عوامل مربوط به انگل

۱-۳-۱-۲-عوامل مربوط به میزبان

۱-۳-۱-۳-عوامل مربوط به محیط

۱-۴-آنتی ژنهای توکسوپلاسما گوندی

۱-۵-واکسیناسیون

۱-۶-بیماریزایی

۱-۷-توکسوپلاسموزیس مادرزادی

۱-۸-تظاهرات بالینی

۱-۹-تشخیص توکسوپلاسموز

۱-۹-۱- تشخیص مستقیم

۱-۹-۱-۱-تشخیص هیستولوژی (بافت شناسی

۱-۹-۱-۲- جداسازی توکسوپلاسما گوندی

۱-۹-۱-۳-تکنیک واکنش زنجیری پلیمراز (PCR1-15-2-تشخیص غیر مستقیم

۱-۹-۲-تشخیص غیر مستقیم .

۱-۹-۲-۱- تست رنگی سابین – فلدمن

۱-۹-۲-۲- سنجش آنتی بادی فلوئورسنت غیر مستقیم

۱-۹-۲-۳- تست سنجش آگلوتیناسین ایمنوسوربنت

۱-۱۰-الایزا (ELISA)

۱-۱۰-۱- الایزای مستقیم

۱-۱۰-۲- الایزای غیر مستقیم

۱-۱۰-۳- الایزای ساندویچ

۱-۱۰-۳-۱-الایزای ساندویچ مستقیم

۱-۱۰-۳-۲-الایزای ساندویچ غیر مستقیم

۱-۱۰-۴- الایزای رقابتی یا مهاری

۱-۱۱-کاربرد پروتئین های نوترکیب در تشخیص توکسوپلاسماَ

۱-۱۲-تولید پروتئین نوترکیب

۱-۱۳-تشخیص سرولوژی توکسوپلاسموزیس در دوران حاملگی

۱-۱۴-ارزش تشخیصی ایزوتایپ های مختلف ایمونوگلوبولین

اختصاصی توکسوپلاسما در تشخیص عفونت

۱-۱۵-کاربرد IgGAvidity در افتراق عفونت حاد از مزمن توکسوپلاسموزیس

۱-۱۶-درمان

۱-۱۷-پیشگیری

۱-۱۸- بیان مسئله و اهمیت آن

۱-۱۹- دلایل انتخاب موضوع

۱-۲۰-اهداف و فرضیا ت

فصل دوم: مروری بر تحقیقات گذشته

۲-۱- مروری بر تحقیقات گذشته

فصل سوم: مواد و روشها

۳-۱- تخلیص پروتئین با روش کروماتوگرافی تمایلی

۳-۱-۱-مکانیسم تخلیص پروتئین با روش کروماتوگرافی تمایلی

۳-۱-۲- تهیه و تخلیص پروتئین های  نو ترکیب rGRA7 (pUET-GRA7) و

rGRA6(PUET-GRA6

۳-۲- بررسی و تائید پروتئین های تخلیص شده

۳-۲-۱- بررسی و تائید پروتئین های نوترکیب GRA7 و GRA6 بوسیله آنالیز SDS-PAGE

۳-۲-۲- تائید هویت پروتئین بیان شده با روش وسترن بلات

۳-۳- دیالیز نمونه های تخلیص شده

۳-۴- تعیین غلظت پروتئین

۳-۵- سیستم های الایزا(اصول کار)

۳-۵-۱- طراحی سیستم های الایزا

۳-۵-۱-۱- نکات تکنیکی در الایزا

۳-۵-۱-۲- برخی مشکلات در الایزا

۳-۶- بررسی پتانسیل PUET-GRA7 و PUET-GRA6 در تشخیص عفونت حاد و مزمن

توکسوپلاسموز با روش الایزا

۳-۶-۱-برقراری شرایط الایزا

۳-۶-۲- استفاده از لیزات باکتری در الایزا

۳-۷- اندازه گیری میزان آنتی بادی به روش الایزای غیر مستقیم

۳-۸-تعیین Cut off  در روش الایزا

۳-۹- اندازه گیری میزان آنتی بادی IgG با کیت تجاری Euroimmun

۳-۱۰- اندازه گیری میزان آنتی بادی IgM با کیت تجاری Euroimmun

۳-۱۱- برقراری شرایط بهینه به منظور محاسبه Avidity Index IgG

۳-۱۲- اندازه گیری IgG Avidity Index  با استفاده از پروتئین های نوترکیب PUET-GRA7 و

PUET-GRA6

۳-۱۳- اندازه گیری IgG Avidity Index  با استفاده از کیت تجاری EUROIMMUN

۳-۱۴- اندازه گیری IgG Avidity Index  با استفاده از کیت تجاری Microgen

۳-۱۵- محاسبه اندکس اویدیته نسبی (RAI) Relative avidity Index

۳-۱۶- کنترل کیفی

۳-۱۶-۱- حساسیت

۳-۱۷-طراحی تحقیق

۳-۱۸- تعداد نمونه و روش نمونه گیری

۳-۱۸-۱- تعداد نمونه

۳-۱۸-۲- روش نمونه گیری

فصل چهارم: نتایج آزمایشات

۴-۱ :تهیه و تخلیص پروتئین های  نو ترکیب rGRA7 (pUET-GRA7 و rGRA6

(PUET-GRA6

۴-۲- تایید هویت پروتئین های تخلیص شده با روش وسترن بلات

۴-۳- بررسیIgG,IgM,IgG Avidity نمونه های سرمی با کیت استاندارد Euroimmun

۴-۳-۱- نتیجه آزمایشات IgG ELISA  مخصوص توکسوپلاسما سرمهای

ایرانی با کیت Euroimmun..

۴-۳-۲- نتیجه آزمایشات IgM ELISA  مخصوص توکسوپلاسما سرمهای با کیت Euroimmun

۴-۳-۳-نتیجه آزمایشات IgG Avidity ELISA  مخصوص توکسوپلاسما سرم ها

با کیت Euroimmun

۴-۴- برقراری شرایط ELISA  Avidity با پروتئین های نوترکیب

۴-۵- نتایج آزمایش Avidity ELISA  با استفاده از پروتئین نوترکیب GRA6 برای تمایز

عفونت حاد ومزمن در سرم های زنان باردار

۴-۶- نتایج آزمایش Avidity ELISA  با استفاده از پروتئین نوترکیب GRA7 برای تمایز

عفونت حاد ومزمن در سرم های زنان باردار ایران

۴-۷- بررسی نتایج ناهمخوان بین الایزا اویدیته با پروتئین های GRA6 وGRA7 و کیت

Euroimmun با استفاده از کیت Microgen

فصل پنجم:بحث، پیشنهادات